信息中心

首页 » 资讯 » 干货分享 | 考马斯亮蓝染色法

干货分享 | 考马斯亮蓝染色法

浏览数量： 0 作者：本站编辑发布时间： 2024-08-05 来源：本站

["wechat","weibo","qzone","douban","email"]

在蛋白质研究中，清晰的蛋白质可视化是关键。考马斯亮蓝染色法是一个经典且高效的解决方案，可以快速显示凝胶中的蛋白质条带，无论是新手还是经验丰富的研究者，都能从中获益。让我们一起了解这项实用的染色技术吧！

v2-9fc97ca6a1e5518500a16414d558da28_1440w

概念

考马斯亮蓝染色法是一种广泛使用的蛋白质染色技术。它通过亮蓝G-250与蛋白质的结合，使蛋白质在凝胶中呈现蓝色，从而可以在凝胶中可视化蛋白质。

分类

考马斯亮蓝染色主要有两种类型：快速染色和传统染色。快速染色可以在1-2小时内完成，但灵敏度较低，传统染色需要更长的时间（通常一夜），但灵敏度更高。

实验步骤

微信图片_20240801170328

01 蛋白质电泳

首先通过SDS-PAGE电泳分离蛋白质，并根据蛋白质的大小和电荷选择合适的凝胶和电泳条件。

02 染色

电泳结束后，将凝胶放入含亮蓝G-250染色液的容器中，放在摇床上摇动，确保染色液均匀接触到凝胶的每一部分。快速染色通常需要摇动1小时，传统染色则需要摇动一夜。

03 去染

将凝胶从染色液中取出，放入去染液中去除多余的染色液，使得背景清晰。快速去染通常需摇动30分钟至1小时，传统去染则需摇动2-3小时，或直到蛋白质条带清晰可见。

04 观察与记录

将凝胶放在显微镜下观察结果，必要时可用相机或扫描仪记录结果。

常用试剂配方

01 染色液配方

a、亮蓝G-250：0.1%（w/v）

b、甲醇：50%（v/v）

c、醋酸：10%（v/v）

d、去离子水：余量

e、操作步骤：将亮蓝G-250溶解在甲醇中，加入醋酸，再加入去离子水，调整到最终体积。

02 去染液配方

a、甲醇：40%（v/v）

b、醋酸：10%（v/v）

c、去离子水：余量

d、操作步骤：混合甲醇和醋酸，再加入去离子水，调整到最终体积。

常见问题与解决方案

问：染色效果不好

答：可能是染色时间不足或染色液配制不当。可以延长染色时间或检查染色液配制，确保亮蓝G-250浓度和pH值都在正确的范围内。

问：背景过深

答：可能是去染不充分。可考虑延长去染时间或更换新鲜去染液。

问：蛋白质条带不明显

答：可能是蛋白质浓度过低或电泳条件不适。可增加样本蛋白质浓度或优化电泳条件（调整电压或电泳时间）。