DNA凝胶回收总踩坑？操作步骤及常见问题解析看这里

在分子生物学研究领域，基因克隆、基因表达分析、PCR产物验证等实验对DNA样本的纯度与完整性要求较高。DNA凝胶回收作为获取高纯度目标DNA片段的关键技术，其标准化操作流程与实验耗材的选择，对后续实验的顺利开展具有重要影响。

从样本预处理、DNA吸附洗脱到杂质去除的每个环节，不仅需要科学严谨的操作步骤，还需优质的适配实验耗材，以有效降低样本损失与外源污染风险。爱津生物纯化柱凭借其可靠的性能表现，可在DNA凝胶回收流程中发挥重要作用，为科研工作者提供实验支持。

01 实验原理剖析

PCR扩增产物经过琼脂糖凝胶电泳后，按分子量大小被分开，排列在凝胶中，跟DNA Marker分子量的对比下，找到目的DNA带所在的凝胶，并把它切下来，加热或用特殊的试剂熔解凝胶，使DNA溶回到溶液中，再经过乙醇沉淀或过柱即可获得目的DNA片段。

02 实验操作流程

① 样本预处理与结合缓冲液混合

将PCR反应混合物转移至1.5mL微量离心管，按1:3比例加入Binding Buffer I。

② DNA吸附与初步离心

将纯化柱置于一个2mL收集管中，将上一步骤的混合液转移至纯化柱中，室温竖直放置2分钟，随后以8000 rpm的转速离心1分钟。

③ 首次洗涤杂质去除

弃去收集管中的液体，向纯化柱中加入500μL Wash Solution，12000 rpm离心1分钟，弃去收集管中的液体，将纯化柱放回原来的收集管中。爱津纯化柱可提供装配优质玻璃纤维膜，在洗涤过程中既能高效截留DNA，性能稳定，重复性好，确保DNA纯度。

④ 二次洗涤深度净化

再次添加500μL Wash Solution到纯化柱中，12000 rpm离心1分钟。弃去收集管中的液体，随后再次离心，去除残留的Wash Solution。

⑤ DNA洗脱与保存

将纯化柱转移至干净的1.5mL微量离心管，在纯化柱膜中央加入30 - 50μL Elution Buffer，50℃温浴2分钟。12000 rpm离心1分钟，将PCR产物置于-20℃冷冻保存或立即试用。爱津纯化柱可实现轻松单手开合，且密封性强，有效避免样本在操作过程中受到污染。

03 常见问题深度剖析与解决方案

① 目的产物回收率低

问题原因

▪ 紫外灯下切胶操作耗时过长，导致核酸长时间暴露于紫外辐射，分子结构可能发生变化，从而失去功能；

▪ 电泳时所使用的缓冲液长期未更换，pH值发生改变，影响DNA吸附。

解决方法

▪ 优化切胶流程，缩短紫外照射时间；

▪ 定期更换电泳缓冲液，确保其pH值处于适宜范围。

② 洗脱效率低

问题原因

▪ 洗涤步骤后，残留乙醇未充分挥发，阻碍DNA从纯化柱膜上洗脱；

▪ Elution Buffer未准确滴加至膜上，导致DNA溶解不充分。

解决方法

▪ 溶液转移至纯化柱加入Wash Solution离心两次后，需将装有纯化柱的管盖打开静置，使残留乙醇充分挥发；

▪ 添加Elution Buffer时，必须确保缓冲液直接滴在膜上。

③ 琼脂糖凝胶未完全融化

问题原因

▪ 55℃水浴溶胶过程中，凝胶未充分混匀，导致局部未完全溶解；

▪ 胶块体积过大，不仅会降低溶胶效率，导致溶液pH值异常，还可能使溶液颜色发生改变。

解决方法

▪ 溶胶时多次上下颠倒使凝胶充分融化混匀，确保无固体琼脂糖残留，胶溶化后，一般情况下，将呈现淡黄色或几乎无色；

▪ 若胶块过大，可适当增加溶胶液用量，直至溶液颜色恢复正常。

④ 凝胶切块过大

问题原因

未精准切除不含目的片段的琼脂糖凝胶，导致凝胶体积过大，增加后续处理难度，影响DNA回收率与纯度。

左侧为合适大小的胶块，右侧为体积过大的胶块

解决方法

仔细辨别目的条带，尽可能切除多余凝胶，减小凝胶体积，提高 DNA回收效率与纯度。

⑤ 外源DNA污染

问题原因

实验环境清洁度不达标，操作过程未严格遵循无菌操作规范，导致外源DNA混入样本。

解决方法

确保实验在洁净环境中进行，严格执行无菌操作流程，减少外源DNA污染风险。

04 注意事项

① 试剂使用规范

要严格按照试剂盒说明书操作，例如Wash Solution中是否需要加入一定体积的无水乙醇，体积数目根据试剂盒试剂要求而定等。

② 安全防护措施

核酸染料多具有潜在毒性，操作过程中需佩戴手套、护目镜等防护装备，规范处理废弃物，避免环境污染与人体伤害。

05 相关产品推荐-爱津纯化柱

在DNA凝胶回收实验常遇回收率不理想、样本易受污染等情况时，爱津纯化柱以多项性能优势，为实验顺利开展提供可靠支持。

▪ 采用符合USP Class VI标准的进口高分子聚丙烯（PP）材质，无热原、无内毒素、无DNase/RNase；

▪ 壁厚均匀，高速离心不爆管，安全可靠；

▪ 可承受高速离心，最大离心力可达24000xg；

▪ 高精度模具生产，无表面涂层，不会污染样品；

▪ 可轻松单手打开和关闭，密封严实；

▪ 可提供装配优质玻璃纤维膜，提取得率高，性能稳定，重复性好，适用于PCR、酶切、测序、杂交等各种实验操作。